2. 持久缓解与具有细胞毒性和增殖潜力的CD8⁺ Tem亚群增加相关

对CD8⁺ T细胞亚群分析显示，在CAR-T细胞治疗后LtR与R患者均呈现初始T细胞（Tn）/中央记忆T细胞（Tcm）减少而高细胞毒性效应记忆T细胞（Tem）增加的特征变化，这些Tem细胞高表达与增强抗肿瘤免疫应答相关的标志物（NKG7、IL32）及循环肿瘤浸润淋巴细胞标志物（KLRD1和CD74）。值得注意的是，相较于R患者，LtR患者在CAR-T细胞治疗前后高细胞毒性Tem均更多（p＜0.05），此外，LtR患者也表现出更显著的TGFb1⁺CXCR4⁺ Tem亚群富集（p＜0.05），该亚群同时具备记忆前体效应细胞和细胞毒性效应细胞的表型特征。

3. 持久缓解与细胞毒性CD4⁺ T细胞增多和Treg减少相关

对CD4+ T细胞亚群分析显示，在CAR-T细胞回输后4周，LtR患者的细胞毒性CD4⁺ T细胞比例显著高于R患者（p=0.001），其特征为细胞毒性标志物（GZMA、GZMB、GZMK、GZMH、GNLY）高表达。而R患者则呈现明显的免疫抑制性特征：包括更高比例的调节性T细胞（Treg）、初始样T细胞（Tn/Tcm、Teh/TCF7⁺LEF1⁺）和效应辅助T细胞（Th2、TH17、Th2/Th17）。此外，NR患者的CD4+ T细胞亚群分布也与LtR患者存在显著差异，表现为Tn/Tcm、Th2/Th17、Tem/Teh和Ki67+Tex细胞亚群比例增多。

4. 持久缓解与NK细胞细胞毒性和趋化功能增强相关

与R患者相比，LtR患者在单采时即表现出自然杀伤（NK）细胞细胞毒性和趋化基因（GNLY、XCL2、IFIT2、CD52）的显著上调。在CAR-T细胞回输后4周，LtR患者的NK细胞进一步展现出更强的细胞毒性和促炎特性，表现为细胞活化、细胞毒性及促炎表型相关基因（DUSP2、CCL5、IL32、GZMA、IFNG、PRF1、CCL3、CCL4、GZMB、CD74）的上调。相比之下，NR患者单采时即存在免疫调节基因（NFKBIA、NFKBIZ、CD52）以及促炎和IFN诱导基因（CCL3、CCL5、IL-32、TNF、IFITM2、IFIT2）的下调，且在CAR-T细胞回输后4周仍表现出细胞毒性标志物和促炎趋化因子（CCL5、CCL3、CL4、TNF、IFNG、GNLY）的持续抑制，提示其NK细胞反应虽存在但整体功能受损。

5. 持久缓解与单核细胞功能转变相关

在单采时，R和NR患者的单核细胞数量高于LtR患者。LtR患者的单核细胞在CAR-T细胞治疗后4周表现出独特的动态变化：从白细胞分离时的促炎状态（表现为NF-κB/TLR信号通路 [NFKBIA、CXCL8、CCL3] 和干扰素途径 [STAT1、IFI30] 激活）转变为适应性免疫支持表型（NF-κB [IL1B、NFKBIA] 和补体途径 [C5AR1] 下调，同时抗原呈递基因（CD86）和干扰素途径（IFI30）上调），这种早期免疫激活可能促进了有效的T细胞募集和抗原呈递。相比之下，R患者的单核细胞未能完成这种功能转变，仍维持应激和缺氧相关通路（HSPA5、SOD2）的激活以及通过NF-κB（NFKB1、TNFAIP3、ICAM1）和氧化应激基因（MT-ND4L、MT-CYB）介导的慢性炎症信号。而NR患者的单核细胞则表现出持续的促炎和补体途径激活（CXCL8、S100A9、C5AR1）以及自噬相关应激标志物（HMOX1、TIMP1、HSPA8）的表达，形成了一个慢性炎症且易疲劳的微环境，这可能损害了适应性免疫反应的效能。

6. 持久缓解与细胞毒性CD8⁺和CD4⁺ T细胞克隆扩增相关

通过单细胞免疫谱分析α/β T细胞受体（TCR）克隆发现细胞毒性CD8⁺和CD4⁺ T细胞较效应辅助CD4⁺ T细胞和初始样CD8⁺ T细胞表现出更强的克隆扩增。追踪分析显示，在CAR-T细胞回输后4周，LtR患者的细胞毒性CD8⁺和CD4⁺ T细胞亚群（包括CD8⁺ Tem/TGFb1⁺CXCR4⁺、高细胞毒性/促炎性CD8⁺ Tem及细胞毒性CD4⁺ T细胞）中观察到大量克隆扩增。在接受CAR-T细胞治疗后4周时，50%的LtR患者出现了至少2种细胞毒性α/β TCR的扩增，这一比例高于R/NR患者 (16%/12%)。此外，LtR患者的细胞毒性克隆数量在治疗后6个月和12个月期间持续增加.

参考文献：

[1]. Cheloni G, et al. Nat Commun. 2025;16(1):4819.