该研究为一项单中心、观察性研究，分析了13例接受CAR-T细胞治疗的R/R DLBCL患者的回输产品。

对CAR-T细胞产品的标志物进行分析。结果表明，CAR⁺CD4⁺和CAR⁺CD8⁺ T细胞比例以及CD4/CD8比例与长期缓解未有显著相关性。但在非缓解者中，CD3⁺、CD3⁺CD4⁺和CD3⁺CD8⁺细胞中含有的LAG3⁺、Ki67⁺和CD71⁺细胞比例显著更高，且这些标志物的平均金属强度（MMI）也显著增加。相反，在缓解者中，CD3、CD7、CXCR3和CXCR5高表达，且在CD8⁺亚群中NKG2D高表达。

研究进一步分析了已确定标志物的共表达情况，以识别可预测长期缓解的CAR-T细胞亚群。将CAR⁺CD3⁺细胞分为CD4⁺和CD8⁺两个亚群。在CD4⁺亚群中，非缓解者的C4-6和C4-7亚群比例较高，表现为CXCR3和CD7低表达，但CD71高表达，且C4-7亚群的Ki67和LAG3也高表达。在CD8⁺亚群中，缓解者富含C8-3亚群，表现为CXCR3和CD7高表达，但Ki67和LAG3低表达；而非缓解者富含C8-6亚群，表现为CXCR3、CD7和NKG2D低表达，但LAG3高表达。此外，在CAR⁺CD3⁺亚群中，缓解者和非缓解者CXCR3⁺CD7⁺亚群占比分别为85%和65%；在CD8⁺亚群中，缓解者和非缓解者CXCR3⁺CD7⁺亚群占比分别为90%和75%。

通过对比CXCR3⁺CD7^-、CXCR3^-CD7⁺ 和 CXCR3^- CD7^-亚群中其他标志物的共表达，进一步确定CXCR3⁺CD7⁺亚群特征。结果显示，CXCR3^- CD7^-亚群标志物表达最低，仅CD71高表达。CXCR3⁺CD7⁺亚群的穿孔素、颗粒酶B和NKG2D表达最高，表明效应能力最强。进一步分析发现，非缓解者的CXCR3⁺CD7⁺LAG3⁺亚群比例是缓解者的2倍（占CD3⁺CAR⁺亚群比例：40% vs 20%）。相反，缓解者与非缓解者相比，CXCR3⁺CD7⁺NKG2D⁺亚群在的CD8⁺亚群中显著更高（占CD3⁺CD8⁺CAR⁺亚群比例：80% vs 40%）。表明缓解者中的 CXCR3⁺CD7⁺CAR⁺亚群具有独特的细胞毒性作用，对于有效的抗肿瘤作用至关重要。

研究探讨了CXCR3⁺CD7⁺亚群中CD71、LAG3和NKG2D对CAR-T细胞治疗缓解的预测价值。结果显示，除CD3⁺亚群中的NKG2D和CAR⁺CD8⁺亚群中的CD71⁺外，其他标志物比例在缓解者和非缓解者间有显著性差异。通过最佳临界值对患者缓解重新分类，其他标记物的受试者工作特性曲线（ROC）分析均显示预测性。特别是，CXCR3⁺CD7⁺亚群的LAG3阳性和NKG2D阴性与较差的PFS相关。

进一步分析CXCR3、CD7、NKG2D、LAG3和Ki67在CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺和CXCR3⁺CD7⁺不同亚群中的表达水平，以预测长期缓解。结果显示，除CD4⁺CXCR3⁺CD7⁺和CD8⁺CXCR3⁺CD7⁺亚群的Ki67，所有标志物可通过ROC分析可有效区分缓解这者和非缓解者，p值为0.0034-0.0415。CD7 MMI在CD8⁺亚群中表现最佳。KM分析显示，多数标志物显著预测6个月PFS。最有效的预测因子是CD8⁺和CD8⁺CXCR3⁺CD7⁺CAR-T细胞亚群中的CD7 MMI。

为评估特定CAR-T细胞亚群的预测潜力，独立于已知的PFS，分析了CD3⁺CAR⁺、CD3⁺CD4⁺CAR⁺或CD3⁺CD8⁺CAR⁺T细胞中的CXCR3和CD7 MMI。KM结果显示，除CD8⁺CD7⁺ MMI（p=0.1646）外，其他聚类对6个月PFS的预测均显著（p=0.0004-0.0116）。表明CXCR3和CD7高表达与PFS延长相关。进一步基于CD3⁺CXCR3⁺CD7⁺亚群上多个标志物（CXCR3、CD7、CD71、NKG2D、LAG3和Ki67 MMI）的同时表达来区分缓解者和非缓解者。研究确定两个不同的聚类：聚类1由四例非缓解者组成，聚类2由所有8例缓解者和1例非缓解者组成。结果显示，聚类1是四个非缓解者聚集，而聚类2中的一个非缓解者更接近于缓解。提示大部分非缓解者和缓解者间的CAR-T细胞表型存在显著性差异。

某些标志物是相关的，可能形成与缓解情况相关的两种不同的表型。非缓解者表现为LAG3和CD71高表达，CXCR3和CD7低表达，而缓解者表现为CXCR3和CD7高表达，LAG3和CD71低表达。CXCR3与CD7以及LAG3与CD71表达水平呈正相关，CXCR3与LAG3、CD71以及NKG2D、NKG2D与LAG3表达水平呈负相关，意味着这些标志物之间存在互斥性。在所有T细胞亚群中，LAG3与Ki67表达呈正相关。此外，在CD8⁺亚群中，CXCR3与NKG2D表达也呈正相关。

在对回输后30天内的循环CXCR3⁺ CD7⁺亚群进行纵向分析，以识别出与长期缓解相关的标志物。结果表明，回输后3-7天，缓解者和非缓解者的CD3⁺细胞比例均增加，但仅缓解者表现出CAR⁺ T细胞大幅扩增，这种扩增是由 CXCR3⁺CD7⁺ CAR⁺ T细胞驱动的（在第7天，缓解者占CD45⁺ 亚群的 12.0%，非缓解者仅占2.7%）。回输后第3-10天，缓解者的CXCR3和Ki67表达显著增加，表明其增殖和激活能力增强，而未缓解者无此现象。回输第7天，缓解者与未缓解者相比，CXCR3和Ki67表达增加，LAG3表达则无显著差异。CXCR3 结合趋化因子 CXCL9 和 CXCL10 的循环水平在缓解者和非缓解者中均升高，且在扩增期没有增加，表明CXCR3⁺CD7⁺亚群的活化增殖是疗效关键因素且不依赖趋化因子浓度。此外，在回输10天后，缓解者的CXCR3⁺CD7⁺CD3⁺CAR⁺ 亚群的穿孔素水平显著升高，表明其细胞毒性作用增强。这些结果表明缓解者的CXCR3⁺CD7⁺ CAR⁺ 亚群不仅扩增能力更强，还具有更好的增殖活性和细胞毒性作用，其动态变化可能是介导抗肿瘤作用和长期缓解的核心机制。